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昆仑雪菊抗病毒物质的提取与分离

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提取:晾干后的昆仑雪菊根部于烘干箱中45 ℃烘干后,经粉碎机粉碎并过40目筛. 称取2.8 kg的干粉,用6倍体积的95%的乙醇浸泡4次,每次3 d,过滤浸液,滤液减压浓缩,合并每次浓缩所得浸膏,即为乙醇提取物(227 g).分离:样品的乙醇浸膏依次用石油醚、氯仿、正丁醇进行萃取. 萃取时每次加入的溶剂体积大约是水体积的一半,直至加入的溶剂接近无色后更换另一种溶剂进行萃取. 采用正丁醇萃取时,先于正丁醇中加入蒸馏水使之处于水饱和状态后再进行萃取. 分别对所得的萃取物进行抗TMV活性测定,选择其中抗病毒活性最好的石油醚萃取物,采用柱层析对其进一步分离. 将200~300目层析用硅胶置烘干箱中,于110 ℃下烘干活化1 h,冷却后,用石油醚装柱. 取石油醚萃取物35 g用石油醚溶解后,加入一定量的硅胶混匀,待溶剂挥干后上柱. 依次以石油醚、氯仿、丙酮为洗脱剂进行洗脱,流出液每250 mL收集一份,分别对各收集组分进行薄层层析分析,合并含相同组分的部分,并测定其抗病毒活性. 发现由第20、21、22部分合并成的流出物抗病毒活性最好. 取该流出物3.8 g再次进行硅胶层析分离,以不同配比的石油醚—丙酮为洗脱剂进行梯度洗脱,分别获得1个黄色和1个白色混晶R1和R2. 分别采用高效液相色谱对R1和R2进一步分离纯化,以石油醚—丙酮(9 : 1)为洗脱剂,流速为4 mL/min进行分离,从R1获得化合物1和化合物2;以氯仿—丙酮(9 : 1)为洗脱剂,流速为4 mL/min进行分离,从R2中获得化合物3、化合物4和化合物5.

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